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已知的很多SNP位點正好位于限制性內(nèi)切酶的識別區(qū)域，針對這些SNP位點我們就可以使用此方法進行SNP分型。尤其是對于大樣品量的多個SNP分型來說，此方法的優(yōu)勢較為明顯。
技術(shù)方法：
RFLP技術(shù)于1980年由人類遺傳學(xué)家Bostein提出。它是第一代DNA分子標記技術(shù)。Donis—Keller利用此技術(shù)于1987年構(gòu)建成第一張人的遺傳圖譜。DNA分子水平上的多態(tài)性檢測技術(shù)是進行基因組研究的基礎(chǔ)。已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據(jù)不同品種（個體）基因組的限制性內(nèi)切酶的酶切位點堿基發(fā)生突變，或酶切位點之間發(fā)生了堿基的插入、缺失，導(dǎo)致酶切片段大小發(fā)生了變化，通過電泳將其區(qū)分。現(xiàn)在我們用熒光標記其PCR引物，通過測序毛細管電泳來精確區(qū)分酶切片段大小，精度可以達到1bp的差異。通過對同一個位點的PCR產(chǎn)物不同SIZE的引物設(shè)計，實現(xiàn)了多樣本的多重酶切，大大降低了檢測成本。 我們可以利用限制性內(nèi)切酶的特殊屬性來對一些SNP進行分型。有些SNP多態(tài)位點正好處于限制性內(nèi)切酶的識別位點處，其中一種多態(tài)對應(yīng)的PCR擴增片斷能夠被相應(yīng)的內(nèi)切酶切動，而另一種卻不能，因此通過對酶切后的PCR產(chǎn)物電泳后的片斷長度分析可知檢測樣本在該位點處的基因型。如果檢測SNP位點不存在合適的酶切位點，往往可以通過在PCR引物3’端改變個別堿基引入限制性內(nèi)切酶酶切位點，通過這種引物修飾法可以實現(xiàn)絕大多數(shù)SNP位點的分型都能用RFLP分析來實現(xiàn)。整個技術(shù)的示意圖(以KpnI酶切位點SNP為例)如下：  現(xiàn)在我們通過熒光標記PCR引物中的一條引物，另一條引物設(shè)計在序列的不同位置實現(xiàn)了，多位點擴增，多樣本一起酶切，酶切PCR產(chǎn)物通過跑測序毛細管電泳將其精確區(qū)分，大大降低其檢測成本。 應(yīng)用領(lǐng)域： 本方法涉及到很多需要對突變或者SNP多態(tài)進行分型的遺傳研究領(lǐng)域。
檢測對象：
DNA 服務(wù)內(nèi)容：
檢測實例：
1. 4個位點，三個樣本SNP分析圖  2. 1個位點，三個樣本SNP分析圖  3. 1個位點，一個樣本SNP分析圖  |
