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從某一特定組織細(xì)胞中獲得的總RNA作為模板利用反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄成為cDNA。
技術(shù)方法：
利用polyT(24)，隨機(jī)引物N9或基因特異性引物和M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行cDNA的合成，一次反應(yīng)RNA用量為1ug, 反應(yīng)體系為20μl。反轉(zhuǎn)錄引物的選擇根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求而定，通常情況下采用polyT+N9, 對(duì)于只研究有限基因的項(xiàng)目，可采用基因特異性引物。利用cDNA特異的POLR2A擴(kuò)增引物對(duì)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增質(zhì)檢。有特殊要求請(qǐng)來(lái)電咨詢。 應(yīng)用領(lǐng)域: 涉及分子生物學(xué)和基因組學(xué)表達(dá)水平分析及基因功能研究的以RNA為分析對(duì)象的實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域。
樣本要求：
不同組織細(xì)胞來(lái)源的總RNA, 要求有清晰的電泳圖片。 服務(wù)內(nèi)容：
檢測(cè)實(shí)例：
瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 針對(duì)cDNA利用POLR2A引物擴(kuò)增的產(chǎn)物。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M  Marker為DL500,1-10號(hào)為10個(gè)逆轉(zhuǎn)錄樣本，POLR2A擴(kuò)增片段大小為126bp。 依所用引物不同有以下幾種轉(zhuǎn)錄方式 隨機(jī)引物N9  |
